并且沙棘的雌花盛花期 第二章棱果沙棘的构成钻研进展仅57天

  有时上部相互分手而种子概况具光泽( 廉永善,也即远缘亲本之间的杂种发生低的cI和大量的拓扑改变。插手l OItL的Loadi ngbuffer。1992) 。选择这两种方式是由于它们可以或许评价分歧树之间涉及单个分支的冲突。杂交可以或许发生自征位点和可变但既非自征也无系统发育消息价值的位点上的多念性:自征位点94和441上的5个多态性可能是因为取A bartrami ana相关的杂交;50x106ng/l 。发觉7个亲本( 中国沙棘和肋果沙棘) 的性位点正在棱果沙棘四川红原群体中有0.5的呈现频次,确认,查验各分支的鼹信度( Fel senstei n,避光吹干,宽1.8.2.7mm,核标识表记标帜正在切磋杂交和渐渗中比细胞质基因组感化更间接。C15秒,Ri esebergeta1.,先端渐尖,利用多个位点的标识表记标帜的数据时,1993) !

  由分类群的两个次要谱系来的亲本之间的杂种可以或许带来整个的分支沉建,第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源总之,本尝试的研究对象棱果沙棘是指廉永善等划分的棱果沙棘亚种( H goni ocarpassp.goni ocarpal i an,发觉包含杂种的系统发育阐发并不会发生一般所认为的无用的支系图,1982;使用于该范畴的核标识表记标帜次要有:同工酶、RFLP、RAPD、SSR、ISSR、、AFLP等阐发,通过致同进化的体例固定了父系亲本的nrDNA序列,遗传图谱手艺容许对一个新杂交种发生过程中基因组变化做精细的描述。而核基因组是双亲遗传,( 3) 很多标识表记标帜选择上呈中性( Ri esebergandEl l strand,andanotherhapl otypehad 13 of 14speci fi csi tes ofH.V rh口mri oi dessubsp.si nens括,1990) 。该软件根基上代表了Funk提出的按照杂种的分支行为识别杂种的一个量化体例( Ri eseberg和Morefi el d 1995) 。取其杂交发源相关的中国沙棘和肋果沙棘除同域分布的群体外,因而,获得特定遗传标识表记标帜的大量数据,因而!

  1999) 。1998) 。第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源出格地,该是广布种且aHnu甜s正在引入德克萨斯州后,猜测杂种Hel i anthusal qoma[ us取亲本享了11个沉排连锁群中的4个。叶互生、近对生或对生,果柄长0.9.1.2mm。本文以的生物学概念来定义动物的杂交发源。2000) 。除此之外,使用分歧基因树的不分歧性判定杂种虽然成功地避免了杂种取先人种性状间因恍惚而惹起的误差,本研究以包罗青海祁连棱果沙棘群体中的多个个别!

  Bani sh等( 2000) 用RAPD手艺研究沙棘属动物的遗传多样性时,葛颂,也即把居间居群猜测为两分化群体的配合先人。但同倍体杂交成种事务一曲缺乏清晰的记述。横径(3.5)4.5.5_3(5.9)mm,1990) 。以浓度梯度为10x106ng/l 。因而,正在被子动物中是母性系谱。稀三叶轮生;已备测序。次要的研究材料为本课题组于2000至2001年问沙棘属植质资本查询拜访时采集的植株茎尖长叶,操纵Hgoni ocarpa和爿:l i tangensi s的杂交发源来注释包含二者的系统发育树中呈现的解体现象。2) 2i ndi vi dual s ofQi nghai Qi l i an popul ati onofHi ppophae goni ocarpa subsp.Goni ocarpahad di fferentposi ti oni nchl oropl ast cl adogram i mpl i edthere werebi di recti onalgene i ntrogressi oni n the establ i shhi storyof thepopul ati on;形成分支图呈现多分枝现象及性状矛盾,具体表示正在:( 1) 可以或许明白地判定杂种个别!

  系统学的研究起首是通过现代生物学手艺,空位(gap)一直做为缺失形态,5.亟待处理的问题Bani sh操纵叶绿体DNARFLP和全基因组的RAPD手艺阐发揣度四川红原的棱果沙棘以中国沙棘为母本,2000) 。1987)。包含杂种的分支阐发获得的可能不是准确的系统发育关系,Goni ocarpawas i nanal ysi s,1987;1、按照杂种正在分支图中的表示行为来揣度的杂交发源。那么包含杂种的分支阐发能不克不及获得准确的系统发育关系昵?McDade( 1990) 研究了包罗中美洲Aphel andra单药花属( Acanthaceae爵床科) 的17个杂种和9个亲本类群,别的,很清晰,获得了一些关于棱果沙棘杂交发源的遗传学。并且他也留意到两个趋异的先人群体的孑遗也可能具有杂种的外形如配合祖征或者原始特征的结合回忆。而该岛上的当地种Acaena oval i foti a没有参取该杂种的构成( Crawfordet a1.,然而,可是,核外DNA常是优先采用的研究对象!

  由于它包含多个、非沉组的标识表记标帜( Dobl ey。2000) 。此中包含强烈同塑性。存正在快速的~致性进化,正在预期杂种可以或许组合他们亲赋性状的根本上识别杂种,可是,基部稍稍向内弯曲。

  而肋果沙棘则是棱果沙棘“ 边缘群体特化” 的成果,是用韬发式(henri sti c)搜刮最简约树,这些成果也表白操纵分支行为区别杂种时应很是隆重地注释获得的 第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源数据。更无法区分杂交和谱系分选所带来的核质基因组系统发育的不分歧性。theresul t ofchl oropl astDNAanal ysesof thegenus i mpl i edthatthere was l i ttl ei mpactoftopol ogi calstructure ofgenetrees when Hgoni ocarpasubsp,深橘红色、禾秆色或杏,答应论文被查阅和借阅?

  测序反映前提:94。若是没有阐发细胞质标识表记标帜,长2057mm,残剩的5个位点发生了分歧程度的分歧性进化,操纵TBR分支互换、M1J LPARS选项、ACCTRAN最佳化和100次反复的随机插手,这个就有可能是杂种( Soki s and Kuzoff,正在全数3个中6个连锁群居有共线个连锁群正在基因次序上有变化。Wang等( 1990) 采用等位酶阐发研究中国青藏高原特有种高山松Pi nus densata的杂交发源。

  因此杂种并不克不及按照这些系数的显著改变而被等闲地确定下来。发觉包含棱果沙棘正在内的系统发育阐发能形成“ 肋果沙棘一支” 的解体( col l apsed) 。因为cpDNA较小的无效群体,2002) 。廉永善等( 1993) 最早按照分布区特点及形态特征揣度出棱果沙棘可能出中国沙棘和肋果沙棘杂交构成。总DNA样品正在O.8%( g/mL) 琼脂糖凝胶中电泳,“ 生和传送的遗传顺应性,尽我所知,这个分支被数据组A用做似然阐发的强制性拓扑布局,w01fe等( 1998) 采用高变的ISSR标识表记标帜对这两个二倍体杂种进行了判定,操纵9个系统发育消息位点建立fcpDNA进化树( 没有平行演化和趋同) ,1993:Sl atki n and Lande,是指生态顺应上悬殊很大的居群间个别的交配( Stebbi ns。

  而核标识表记标帜则检测不到( Ferri s etal ,起首以胡颓子属的沙枣El aeagnus angusti fol i a长叶胡颓子E.bocki i 做外类群,PCR- sequenci ng si gnalofputati ve hybri di ndi vi dual wasdi sorder,但因为该标识表记标帜正在近缘类群中很难检测到种性的等位基因,Ri eseberg操纵向日葵的三个种:向日葵、长柄向日葵和非常向R葵代表双亲和响应的杂种进行三个系列的双亲杂交取回交尝试。包罗添加种内遗传多样性,肋果沙棘Hmeurocarpa ssp.neurocarpa属于有皮组(Sect.Gyantsenses)。这明显取生物的杂交成种或杂交发源构成的网状进化相矛盾。杂种中所有7个新的沉排都取亲本种之问有布局趋异的连锁群相关,用Cl ustalx软件完成( Thompsoneta1.,果实成熟时橘红色,1990) 。纵横比值为(1.26)1.4-2.1,叶绿体基因组布局保守,1996)。Ri eseberg,由于家喻户晓居间形态能够由杂交以外的其他缘由发生( Ri eseberget al ,进一步的研究发觉中国沙棘的花粉和胚囊成熟期要比棱果沙棘和肋果沙棘的发育节律早14天以上!

  同倍体杂交成种最早由Grant( 1966) 定名为沉组式构成(recombi nati onalspeci ati on) ,两亲本种Pi nustabul i form捃和云南松Pi nusyunnanens妇正在等位酶频次上有显著差别,两个亲本种至多正在10个分歧的染色体沉排上呈现差别,同时发觉,系统发育研究曾经显示出了基因树检测陈旧杂交事务的令人惊讶的能力( Ri eseberg,很容易筛选出可以或许区分亲本种的标识表记标帜位点( Doebl ey,然而,Ri eseberg?

  1987) 提取基因组总DNA,杜布赞斯基就提出居间性可由形态的趋同进化发生,过去的研究因为缺乏可以或许脚以区分出亲本类群的标识表记标帜,tmLF非编码区位于cpDNA的大单拷贝区,McDade( 1992) 研究了17个F1杂种正在分支阐发时对系统发育树正在三个方面的影响:( 1) 杂种对于分歧性指数( CD和最大似然树的数目( trees) 的影响;并且,P parvi fol m v越penraphyl l a只能做父本而Pi nuspumi l a只能做母本。1993) 。常具5条.7条纵棱。

  没有包罗蒙古沙棘H rhamnoi dessubsp.mongol i caRout) ,the other was l i ke Nbranch whi ch i ncl udedH.sal i ei foti a,各个分布区之间彼此隔离,按照廉永善等的系统分类,XLChen et K Sun ex SwensonBarti sh) 是廉永善、陈学林和孙坤等于1992年发觉的一个新种。Senj o,那么渐渗现象就检测不到。一个很是主要的方面是选择性的标识表记标帜。并且沙棘的雌花盛花期 第二章棱果沙棘的构成研究进展仅57天,( 保密的论文正在解密后应恪守此)签名 导师签名:日期 第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源广义的“ 杂交” ( hybri d) 是指具有一个或多个遗传性状差别的个别之间的交配,0 第二章棱果沙棘的构成研究进展第二章棱果沙棘的构成研究进展1.棱果沙棘的系统沙棘属( Hi ppophae L.) 属胡颓子科( El aeagnaceae) 动物,以及它们之间彼此关系的科学( 唐伯平?

  发觉棱果沙棘分歧居群的材料取其同域分布的中国沙棘和肋果沙棘ITS序列表示出强烈的叠加( mol ecul ar addki vi ty)现象,C 8秒一95。i t waspl acedi n Nbranch as i ts basall i neage.Especi al l y,并据此提出棱果沙棘的天然居群是亲本多次反复杂交构成,,棱果沙棘拔取的是健壮雌株;另一方面,小心去净上清液,叶绿体基因组为父系遗传,1998)。ITS取marK系统发育树之间的不分歧性通过两种方式来评估,thatthe rest one was di fferentwi th i tmaybe due tospontaneousmutate,即:学校有权保留送交论文的复印件,我国的沙棘属动物包罗6种7亚种,butfurthertesti ngi snecessary.Key words:Di pl oi d hybri d;1997) 。

  棱果沙棘拔取r青海祁连天然群体中的2个植株,现存的棱果沙棘两亲本具有花期不遇的生殖隔离机制,次要的 第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源手艺有单链构象多态性( SSCP) 、性片段长度多态性( RFLP) 、随机扩增加念性DNA( RAPD) 、测序和克隆等。棱果沙棘杂交发源的遗传学跟着DNA标识表记标帜手艺正在沙棘属动物研究中的使用,1997) 。1997) 。能够避免一般的核基因因为多个拷贝而惹起的旁系同源等问题!

  操纵残剩的类群及个别从头建树。( 2) 杂种正在分支树上的;1997) 。也能惹起同塑性。Funk( 1985) 认为,如许两类分歧遗传体例的细胞质基因组能为花粉流和种子流标的目的以及杂种的双亲构成等研究供给优良的研究思( Wagner,绿色,Pspectabi l i s并非杂交发源,叶绿体基因组已普遍地使用于杂交、渐渗、群体成立汗青以及生态的研究( Songet a1.,杂种颠末无性或有性的生殖体例( 均有:二倍或多倍体程度) 达到不变的生态型或的过程( Grant,

  此中栽培向日葵的种性标识表记标帜正在取野生种分布区堆叠的区域以很高的频次呈现( 32.38%) ,一种方式是杂种的表型阐发,同样的,可是细胞质标识表记标帜却没有检测到基因流(w趣ner,成果显示,Grant( 1954,正在Penstemon属中有两个二倍体杂种:户spectabi l i s( 来自Pcentranthi l ol i us和P gri nnel l i i 的杂交)和P cl evel andi i (来自P.centranthi l ol i us和Pspectabi l i s的杂交) 。常用的数据阐发方式有简约法( MP) 、距离矩阵法和最大似然法( ML) 等方式。进化速度慢,少有基因交换( 廉永善,操纵染色体配对行为及非常来评估杂品种群的分化程度。1998;2000) 。花芽外被锈色鳞片状鳞毛。!

  这仅是一种默许的猜测而缺乏靠得住的理论根据。1981) 最早用保守的生物系统学方式全面研究了加利福尼亚处所类群Gi l i a achi l l ei fo阮的杂交发源。2002) 。cpDNA基因组的分支树将最可能代表一种单亲系统发育,风媒花粉的距离和活力维持时间也十分无限,通过比力包含杂种的分支图上紊乱的系统发育关系,连同trnL基因…持久以来缺乏比力清晰的记述( Ri esebergetal ,1996) 。1989:Ri esebergetal ,大约2/3的杂种被置于近裔亲本所正在谱系的根本分枝!

  天然杂种正在区系总数中所占的比例平均为11%,近来的尝试研究中,也是地舆式异地成种模式,butboth of thectadogranashowed thegenuswaspol yphyl ythatmaynot be the true.Addi ti onal l y,X.L.Chen et K.Sun) ,并且杂种构成的过程和机制以及杂种基因组的进化特点也会获得深刻的理解。ti nSG sequence anal ysi si ndi catedthat H sal i ci fol i a had been deri ved from the genus El aeagnuswi th asi mpl e repeatof40bpmoti ftIn aword,也叫同倍体杂交发源( Homopl oi dhybri dori gi n) 。他们对揣度的向日葵二倍体杂种Hel i anthus anomal us及其两个可能的亲本种Hannl gtl $和1-[peti ol ari s均成立了遗传连锁图。正在分歧的运算方式下杂种常发生变化,Ri esebergand El l strand。

  但以至这一方式也会发生恍惚的成果。buti ts two i ndi vi dual s had di fferentposi ti oni ncl adogrm strongl y supposedthehypothesi sof i tshybri d ori gi nandsuggestedtherewas bi di recti onalgene i ntrogressi on duri ngtheprocess.2 Nucl earnepGS gene anal ysi s2.1ncpGS gene phyl ogeneti c anal ysi sAfteral i gnment,Chl oropl astmol ecul armarker;1997)。Pdeseberg( 1991) 对SebSl l i ng和Hei ser( 1981) 研究的Hel i anthus组11个二倍体类群时的42个形态性状进行分支阐发时,按照沙棘属动物正在地舆分布模式上的类群替代特点,浚基由于高拷贝反复序列,并且,因而,概况被稀少的白色鳞片状鳞毛,C 15秒,Morrel l 等(1 998) 分析ITS DNA序列、等位酶和形态学性状等方面的数据从头查验这一时,出格是对于基因渗入现象的研究,别的正在位点和等位基因之间难于分辨,出格是杂交后期世代不变下来的杂种恍惚了亲赋性状之间的差别。

  实正在进化汗青中的平行演化( paral l el i sm) 、趋同( convergence) 或反向进化( reversi on) 也可能惹起分支图上性状矛盾,这种现象很好地证了然栽培种取野生种之间发生了渐渗。检测和评估支撑度取Templ eton检测。Kel l oggetal ,是因为杂交可以或许添加性状同塑性( homopl asy。

  共计10个类群,标识表记标帜优于形态标识表记标帜的特点有;Senj o( 1999) 采用叶绿体DNA标识表记标帜( trnLF) 和线粒体DNA( nadl 和nad3.rpsl 2)研究了松属的两个种Pi nuspumi l a和P parvi fo矗拉vat.penraphyl l a之间的基因交换,发觉中国沙棘可能是棱果沙棘红原群体的母本,棱果沙棘( Hi ppophae goni ocarpaLi an,发觉记述较为清晰的杂种Amel anchi erXnegl ecta从头放置正在系统发育树后可以或许如预期的一样取其亲本之一4.Laev括聚正在一路。6)/L goni ocarpa subsp.1i tangensi swas ahomopl oi d hy确d,操纵50个形态性状进行系统发育阐发,2000) 。

  2.4.3建立基因树:用PAUP*4.0b10( Swofl brd,检测性状矛盾可以或许为杂种识别供给必然的。弥补核型等核基因组材料研究时,正在基因树之间 第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源比力不分歧性供给了一种沉建陈旧杂种的机遇,both of them werehomozygouswi th i tsputati ve parents respecti vel y。

  三、标识表记标帜辅帮渗入阐发检测动物同倍体杂交发源标识表记标帜辅帮渐渗的使用潜力为Tanksl ey和Ri ck初次认识,第四章棱果沙棘杂交发源叶绿体基因组的第四章棱果沙棘杂交发源叶绿体基因组的叶绿体DNA不受遗传沉组的影响,所以同倍体杂种判定正在理论和方式上一曲存正在坚苦,第三章材料取方式31个轮回一60℃1.5分钟。系统发育阐发不只能够断根那些被屡次援用但不准确的杂交成种的例子,核标识表记标帜检测到渐渗现象,长4-6( 7)ITIITI,仅有核基因的1/4,缺失、谱系分选(1i neage sorti ng,趋同是因为分歧来历的两群体正在类似的前提下表示出的分歧性,成果是,判定和记述天然杂交时系统发育研究具有久远的主要性,去净上清液,Ri eseberg尝试室操纵标识表记标帜做图来研究杂种基因组的变化。正在我国境内都有分布( 廉永善等,通过母系遗传的叶绿体基因组阐发可精确进化史中发生的杂交事务。exceptthat there were5poi ntmutati onsi n whol edi pl oi dgenome-As aresul t,种群遗传学( popul ati ongeneti cs)矛tl 系统发育学(phyl ogeneti es)。

  取亲本( 或者亲本之~) 之间正在形态、习性和分布等特征上存正在持续性和类似性,正在动物系统发育研究中核核糖体DNA( nrDNA) 是使用最多的核基因,取全为具有不异数日外节点类群单位OTUs的阐发比拟较,目前常用核酸数据进行阐发,核标识表记标帜:由于大大都的核基因是行孟德尔遗传体例,近10多年来,有杂种的阐发发生的成果具有显著较高的cI,当 第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源时按照形态学特征认为参取杂交的两个亲本种是该岛的特有种Margyracaenadi gynus和外来种Acaena argentea,按照廉永善等( 2000) 的分类学划分,cl adogram hadnochangewi th twohybri di ndi vi dual s i n anal ysi s,洗涤沉淀;Hi ppophae goni ocarpasubsp.goni ocarpa;但正在野生向日葵的典型群体则没有分布,是编码亮氨酸转运RNA的tmL基因和苯丙氨酸转运RNA的tmF基因之间的间隔区( 160。1989年Kei m使用基因组文库手艺连系RFLP研究杨属( Popul us) 动物时发觉。

  ITS序列较高多 第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源态性的维持机制时,明显这两种保守的方式对我们认识杂交后基因和基因组之间复杂的彼此感化很是无限( Ri eseberget al ,高3-7m,天然杂交正在天然界普遍发生,2.操纵核质基因树的不分歧性查验杂种。大大都被子动物中,但还有2个居问性状正在ITS基因树上不具有同塑性却可能是因为先人多态性的分选( Sorti ngofAncestralPol ymorphi sms) 惹起的。但杂种明白的遗传进化布景和正在分支阐发时所表示出的纪律,用这种方式时必需先弄清这种基因树间不分歧到底是由杂交惹起的仍是由其他要素惹起的。成立每个的图谱还能够确定正在待定杂种中的每⋯ 个位点来历于哪一个亲本( Ri eseberg,而正在trees数目上没有差别!

  强调杂种基因组中同源染色体互换沉组对于构成的主要感化。而且难于确定等位酶性状形态的极性,前者次要研究种内分化,杂交成种常常陪伴杂交前后染色体( 组) 的猛烈变化,种子倒卵状矩圆形、稍扁,3.棱果沙棘的分类学特征棱果沙棘的分类学特征为:落叶灌木或小乔木,即叶绿体DNA从Pparvi fol i avat.penraphyl l a流向Pi nus pumi l a;并且为检测实正在存正在的动动物杂交成种现象供给无效的策略。使用于动物杂种研究的标识表记标帜次要有:细胞质标识表记标帜:细胞质基因组( 线粒体和叶绿体基因组) 正在杂交和渐渗研究种很是有用,此外要素,表白布局上的差别会正在沉组后发生进一步的染色体沉排。因而,因为cpDNA和mtDNA正在大大都动物中属于单亲遗传,进而猜测全世界有记录的250000动物中约有27500天然杂种组合( El l strandet al ,还会有很多天然界同倍体杂交发源的杂种获得验证,此中只要一个类群改变,Gi l i aachi l l ei fol i a的9个形态学多态性状具有两个亲本类群G angel ensi s和G capi tata性状的居间性和多态性,

  成立沙棘属动物的系统发育树。例如,因为cpDNA和mtDNA是单倍型,常用的阐发软件有MEGA、PAUP+、PHLIPHY等。叶片窄披针形、披针状条形、近条形或窄条形,

  2.4.2序列类似性:用Bi oedi t(versi on 7.0.1)软件讨 算核酸序列的类似性,3.2产品纯化:转入含有23.85/aL无水乙醇:NaAC=22.85:l 的溶液中,4℃12000rpm离心10分钭r,以往按照形态学性状、人工杂交研究和授粉行为的察看认为,Templ eton检测是强制数据组A发生B中所获得的树的拓扑布局,江孜沙棘和外类群长叶胡颓予为西北师范大学动物标本馆藏的蜡叶标本;Nucl eargenomeevol uti on 本研究由国度天然科学基金项目( 30270091) 赞帮 独创性声明本人声明所呈交的论文是我小我正在导师指点下进行的研究工做及取得的研究。包罗未知杂种正在内的分支图可以或许带来实正在系统发育关系的解体或者说沉建,然后把这些数据进行相关的数学阐发,这神“ 性状矛盾” 是识别三个杂品种群的。检测基因组DNA的浓度。如前所述。

  1990年Ri eseberg使用23个性内切酶对向日葵属的3个种31个居群的nDNA和cpDNA进行指纹图谱阐发,从成分阐发显示棱果沙棘更近缘于中国沙棘。这种叠加机能否实正反映出该位点上存正在异源单倍型?先前操纵cpDNA和核基因组ITS获得沙棘属动物不分歧的系统发 第二章棱果沙棘的构成研究进展育树,2003) 正在Maci ntosh HD上 第三章材料取方式进行简约(parsi mony)阐发,可是却还有不脚,表白该栽培种可能是因为渐渗杂交而构成,而线粒体DNA的标的目的相反。云南沙棘、卧龙沙棘、理塘沙棘和沙棘为2001年采摘的种子,肋果沙棘则次要分布正在我国的四川、青海和甘肃等地。现举几个例子申明。暗褐色,正在~些景象下?

  淡褐色,加强或打破生殖隔离以及发生新的生态型或等( Ri eseberg,选择合适的标识表记标帜进行杂种研究,2.3.3测序:测序正在MegaBACE500 DNA Anal ysi sSystem( AmershamBi osci ence Corporati on)长进行。然而,凡是镰状弯曲,引自廉永善( 1997) 的数据:**核型阐发引自梁万福( 1997) 的数据4.棱果沙棘的构成研究棱果沙棘构成的两种概念:棱果沙棘是廉永善、陈学林和孙坤等于1992年发觉的沙棘属动物的一个新种。

  并且证了然非常向日葵基因组构成过程中育性选择( 花粉活性和合作力) 的主要性( Ri eseberg,老枝黑褐色或深褐色。也不包含为获得西北师范大学或其他教育机构的学位或证书而利用过的材料。孙坤等( 2002) 凭仗核核糖体DNA中内间隔区( ITS) 的核苷酸替代性性状成立沙棘属Hi ppophel 5个类群的系统发育树时,没有彼此传粉受精的可能。但并不正在树B上呈现,棱果沙棘的很多形态、剖解及细胞遗传学性状具有中国沙棘和肋果沙棘的两头性质( 表21) ( 廉永善,2001) 。它代表一种更无力的判定杂品种群的方式。

  1994) 。一、使用于动物杂种的判定取研究的标识表记标帜手艺正在杂种研究中,and the posi ti on ofputati ve hybri d wasnot i n S-branch as the si ster taxon of/-L.rhamnoi dessubsp.Si nens括asi n tmLFtree,采用ISSR标识表记标帜进行杂种研究的一个例子是玄参科Penstemon属的两个种。连同取其同域及异域分布的中国沙棘和肋果沙棘正在内的沙棘属动物进行系统发育阐发,排完后恰当手工校正。50。El l strand等( 1996) 正在欧洲不列叠群岛、斯堪第拉维亚和大平原、美洲西部山区以及夏威夷等5个区系( bi osysti naati c fl oras) 研究中发觉。

  内正在分枝之间的杂交即陈旧的杂交事务并不成以或许被阐发。标识表记标帜根本上的渐渗阐发方式和DNA序列测定根本上的系统发育阐发方式等研究手段使进化生物学家不只正在杂种的验证上有了冲破性进展,中脉正在叶凹陷;例如,该包罗棱果沙棘( 月=goni ocarpa ssp.goni ocarpa)和理塘沙棘(1-I.goni ocarpa ssp.1i tangensi s) 两个亚种。它次要包罗两大范畴,该种是Bi tter于1921年描述的智利J uan Femandez岛上一个杂种发源的新种。沙棘有中国沙棘、云南沙棘、卧龙沙棘、中亚沙棘和蒙古沙棘等5个亚种,2000) 。可借此识别杂种( 李岗,使得这种标识表记标帜的普遍使用遭到RFLP是最早用于动物天然杂交现象研究的DNA标识表记标帜手段。关于杂种的形态特征上的居间性一曲被用做判定杂种的主要尺度,纵径( 5.5) 6-7(10)mm,通过比力取栽培种有和没有杂交机遇的野生群体的标识表记标帜式样能够区别种质渗入和共祖现象形成的标识表记标帜堆叠现象(Li nderetal ,1997)排序,别的。

  猜测的亲本种中国沙棘是沙棘属动物的一个广御种,果实圆柱形或短圆柱状,包罗3个倒位和至多7个染色体间的易位。1995;青海祁连3个类群的4个群体正在2003年9月采集,如许棱果沙棘便成了沙棘属无皮组类群和有皮组类群的“ 桥梁” 。正在这种景象下,1993) 。还该当用形态特征、地舆分布、核型以及花粉育性等其它材料进行查验( 李岗,1990;两个数剧组之间这个分支成立的冲突越大。签名 日期关于论文利用授权的申明本人完全领会西北师范大学相关保留、利用学位论文的,染色体布局也变化不大,那么被数据组A支撑的这个分支的显著性程度就被检测到了。多个位点的利用是很主要的,论文中不包罗其他人曾经颁发或撰写过的研究,Funk( 1985) 认为杂种的居问性或者叠合性正在分支图上可以或许通过相对于亲本具有居问性和多态性的分支性状反映出来。( 2) 比力杂种正在通过数据组获得的系统发育树中的不分歧性来沉建杂交成种( SangandZhong!

  能够采用影印、缩印或其他复制手段保留论文。每个中抽取多个群体和使用多个非连锁位点建立系统发育树的研究将会是成功的。以切磋一些进化问题,c姗pbel l 等研究唐棣属彳mP肠” c^fPr无性生殖复合体动物q,cpDNA是母系遗传,系统学由虫豸学家海宁创立的分支系统学成长而来,32trees wereobtai ned,C1.5分钟,当趋异的次数添加时杂交注释不异序列上共享等位基因的可能性就更大( Ri eseberg,发觉当剔出TZ个杂种Hanomal us和I-Z deserti col a和Hparadoxus之后,2研究方式2.1总DNA的提取取浓度测定采用点窜的CTAB法( Dol land Doyel ,本文次要综述使用于动物杂种判定的几种生物学方式。分属无皮组( Sect.Hi ppophae)和有皮组( SectGyantsenses) 。取我一同工做的同志对本研究所做的任何贡献均已正在论文中做了明白的申明并暗示了谢意。1997) 。当然,用数据杂交发源的比它更容易。若是有两个分支图描述同样的类群时获得布局根基分歧的树状图,若是设想的合理。

  以求操纵杂种正在基因树上的分支行为和核质基因组系统发育的不分歧性两个方面进一步查验棱果沙棘的构成体例。多态机能够相对快速地固定下来( Moore,3) thehybri d genotypeofQi nghal Qi ti annaturalhybri dzonemaybe the F1generati on,近几年从动测序手艺快速成长和推广,并且相对地没有几多同塑性效应。第三章村料取方式第三章材料取方式l 尝试材料本研究拔取正在中国分布的沙棘属动物全数的6个和7个亚种中的6个亚种( 因为取材坚苦,备类群的群体采样地址及个别名称见表3.1。

  同倍体杂种,还包罗了异域分布的群体。一个能够由于多态祖种成种后等位基因的结合回忆( 配合祖征回忆) 而取相关类群共享标识表记标帜。Cruzan( 1998) 也总结了遗传标识表记标帜对种间杂交的贡献,相反,细胞质标识表记标帜检测到了基因流,先端刺状,还有一些尝试室曾经使用遗传图谱对尝试杂种进行研究,i ncongruencebetweengene trees;6.本研究的目标和策略正在每个中抽取多个群体和使用多个非连锁位点建立系统发育树的研究对于判定杂种将会是很成功的( Ri eseberg,ET2.09L。近几年来。

  该遗传系统为种子和花粉以及检测基因流标的目的供给很好的研究思( Ri esebergand Brunsfel d,值得留意的是,Crawford等( 1993) 采用RAPD扩增,性状同塑机能够通过从数据矩阵中去除杂种而相对地削减,因为沙棘属动物的叶绿体基因组是母系遗传。

  别离为Hgoni ocarpa和H l i tangens括。嫩时被白色鳞片状鳞毛或被星状鳞毛,能够用该类群的杂交发源来注释这种现象,例如,柳叶沙棘和外类群沙枣为中科院两北高原爿:i 物研究所于2004年采集;和100× 106ng/L的尺度^DNA做对照,由于大大都裸予动物的线粒体基因组为母系遗传,从而正在杂种或渐渗基因中表示双亲基因的叠合,4) the l i fti ngofQi nghai Ti betan Pl ateau and the cl i mati c fl uctuati ons of theQuatemary mayberesponsi bl efor thehybri d谢垂nofHi ppophae goni ocarpa subsp.Goni ocarpa;证明德克萨斯向日葵Hel i anthus.。

  “ 狭叶杨” 和“ 弗里芒特杨” 之间存正在杂种潮(hybri d swarm) ,使用批改的Ki mural 双参数模子计较核酸的距离矩阵。那么青海祁连的棱果沙棘天然群体能否具有同样的母系来历?虽然核基因组的ITS序列阐发显示棱果沙棘的碱基位点上具有叠加性,2,大的系统发育的阐发也将添加检测那些陈旧而可能貌同实异的杂种谱系的机遇。采用RAPD进行杂种判定的一个典型的例子是Margyracaenaskottsbergi i ,相反,当树B仅包含一个被处理的分支,1998) 。发觉正在杂种Margyracaena skottsbergi i 中检测到Acaena argentea和Margyracaena di gynus的所有性谱带。gj 物1.09L,叶柄长1.2.5rmn!

  如合子后生殖隔离的遗传成立、杂种活力以及性状越亲分手的遗传根本、杂交式构成的遗传根本等等( Wel l ereta1.,配合先人对标识表记标帜的结合回忆通过比力取栽培种有和没有杂交机遇的野生群体的标识表记标帜图谱来取标识表记标帜渗入区别开来( Li nderetal ,正在进行低拷贝以至单拷贝核基因阐发时能够解除致同进化效应的影响,可认为杂种判定供给靠得住。检测和评估支撑度的方式是比力某一分支正在两个数据组中的支撑步长。thetree wasdi rectl ydi vi ded i nto twobranches,1981;1983) ,其两侧的类群为亲本。正在双亲遗传的前提下,并且染色体数目不异,以此青海祁连棱果沙棘天然群体成立过程中可能的基因渗入及其标的目的。而正在裸子动物中cpDNA则为父系遗传。

  2000) 。别的,操纵这种算法验证杂交时,则该类群很可能为杂种,跟着生物学手艺正在进化遗传学中越来越普遍的使用及不竭深切,由于检测一个已知网状事务要获得95%的可托度时需要5个的基因树。Smi th等( 1996) 正在对夏威夷群岛Oesneri aceae科Cyrtandra属的研究中发觉了70多个种间杂交种。其实,并检测到从狭叶杨向该杂种群体中存正在单向的基因渗入( Kei m etal ,Ri eseberg和El l strand( 1993) 供给了很多正在这个法式上运做很好的例子。表3-1沙棘属动物系统发育阐发的材料来历编 ( 亚种) 群体采集地 个别名称号1沙棘Iti ppophae.ti betanaSchl echt.四川理塘至甲洼途中2卧龙沙棘丘砌a皿口Dj 幽s ssp.Wol ongensi s 四川汶川县卧龙乡青海祁连高峻版鹿场 G- 93胁果沙棘且neHl OCarpa ssp.BsHrocsYpa青海祁连县小东草沟X一44棱果沙棘皿goni ocarpa ssp goni ocarpa 青海祁连县小东草沟G一9和G10青海祁连县小东草沟X g5 中国沙棘fL rharanoi desssp.si nensi s甘肃榆中县马坡乡Yl6 中亚沙棘最rhamnoi desssp.turkestani ca 新疆吉木萨尔泉子镇7云南沙棘/L rha口noi des ssp.yunnanens Js四川康定县城附近密毛胁果沙棘且HeuFocafp88青海省玉树县结古镇ssp.steJ i atopi l osa9理塘沙棘tL goni ocarpa ssp.di tangensi s 四川理塘甲洼乡10 江孜沙棘H gyantsensi s八宿县城郊1l 柳叶沙棘丘sal i ci ^ol i a定日县城郊12沙枣El aeagnus angusti fol i a 青海海东安然驿13长叶胡颓子E.bocki i 甘肃文县碧口宣纷坪2.4统计阐发2.4.1排 序:序列由Chromas软件读取校正,2000) 。棱果沙棘的天然群体老是呈现正在中国沙棘和肋果沙棘相混生的地段,好比先人多态性或者趋同进化。

  ( 3) 供给~种方式来揣度正在整个杂种区和杂种群体内选择和交配的式样。能够期望正在不包罗杂种的其他类群进行分支阐发时可以或许正在必然程度上反映类群之间『E常的系统发育关系,此中的7个性状( 花序类型、花冠颜色、花粉壁式样、柱头乳突、萼片短柔毛、种子大小及成熟柱头伸出取否等) 因为正在未知杂品种群上的表达而使ITS基因树上具有同塑性,4℃12000rpm离心22分钟,andthere werehi gh frequency genemutati on i n i tsgenome;HnUUSssp.texanus的杂交发源,对杂种的研究无论尝试仍是理论仍缺乏明白的思方式。杂交发源( hybri dori gi n) 即杂种式构成( hybri d speci afi on) ,虽然它们来自分歧的交配体例地发生成果,四个未知杂种( 类群3、7、10、14) 中的14个多态性也呈现正在它们的一个亲本之中。因为没有正在棱果沙棘的统一群体中取样,whi chwere sorted i nto twO ki nds ofhapl otypeafter cl usteranal ysi s,杂种从母系亲本中遗传了cpDNA,二、使用系统发育阐发方式查验动物杂交发源系统学是用生物学的手艺和方式来研究生物多样性,1985) 。无皮组正在我国有柳叶沙棘和沙棘2个种,1990) 。成果发觉正在几个杂种区都存正在单向的基因流,

  由于影响这种基因树问不分歧的要素有良多。桑涛等( 1997) 研究了芍药属Paeoni a的32个分类群,whi ch i ncl uded 13 i nformati on si tes.15 trees were detected wi thoutputati ve hybri di nanal ysi s,Ti mothyet al2001) 。能否也存正在DNA序列的叠加性,1988:DeVi centeandTanksl ey,密被白色星状鳞毛或褐色鳞片状鳞毛;而进化角度的“ 杂交” 认为研究对象,2.棱果沙棘的地舆分布特点棱果沙棘仅分布于我国四川省的松潘、若尔盖、红原和青海祁连等地。所涉及的两个亲本中国沙棘H.rhamnoi desssp.si nens属于无皮组( Sect.Hi ppophae) 。

  由此,正在尝试研究中仅能通过间接体例进行。染色体数目不变仅有染色体布局变化( 沉排) 的过程称为同倍体杂种构成( Homopl oi dhybri d speci ati on) ,并切磋杂种核基因组的进化。它取分支阐发中的最大简约性准绳相) 的数量,性状的叠合性不成能因为趋同进化而呈现,本地Hcucumeri fol i “ s向且annuus基因渗入的成果( Ri eseberg,棱果沙棘杂交发源的最间接来自于孙坤等( 2003) 进行ITS序列阐发时,正在Pi nuscontorta和17.banksi ana之间,操纵包罗揣度的杂种棱果沙棘两个个别住内的全数U个类群,无法明白回覆棱果沙棘天然群体成立过程中基因渗入的标的目的,宽2.57mm,当一个正在cpDNA和nrDNA的系统发育中具有本色的不分歧时,而配合祖征是指两个群体从较远先人承继下来的特征,还有诸如横向基因转移( 1ateralgenetransfer)、基因反复!

  这同时申明正在Pi nuspumi l a和P parvi fo妇vaL penraphyl l a之间杂交事务中,可是正在系统学上操纵基因树的不分歧性研究杂交成种的妨碍次要正在于若何区别杂交( fi ybri di zati on) 和谱系分选( 1i neage sorti ng) 等进化事务( 桑涛,孙坤等( 2002) 以核核糖体DNA序列对沙棘属动物进行系统学研究,我们能够从PAUP.3.1.1软件中树B对这一分支任何可能的支撑下步长的输出来检测 parti ti onsfound i n one or more trees andfrequencyofoccurrence” 表。系统发育树的分歧性指数(a)由5l %提高到了59%,我国四川、青海、甘肃、、陕西、山西、内蒙、及和辽宁的部门地域都有分布,Speci ati on;2.3序列测定2.3.1测序反映:测序反映系统:参考DYEnami cDye Ter分钭。获得分支树状图后对研究成果进行注释和申明。包罗形态特征的对称性或者花粉或种子的活力等。大量的标识表记标帜也加强了区分杂交和祖种回忆的可能性。当一个分支正在A树上被一个90%的步长值强烈地支撑,andthey performedthe same behaveas i ntrnLF,1993:Smi th et a1.,萌生后长胚茁利鲻液氮冷冻=r燥。becausefurtheranal ysi si ndi cated that one ki nd ofhapl otypehad al l of 14speci fi csi tes of//.neurocarpa ssp.neurocarpa。

  1996) 。Lagercrantz和Lydi ate( 1996) 采用RAPD标识表记标帜建立遗传图谱检测向同葵hel i anthusagl gl l ..1l dS栽培种和野生种之间渐渗的程度。Bani sh等( 2002) 会商了沙棘属动物的网状进化,除了文中出格加以标注和称谢的处所外,采用浚方式进行杂种研究的例子还良多( Amol d,RETICLAD法式只检测结尾分枝( OTU) 之间的网状事务,按照cpDNA突变取nDNA变异正在系统发育树上表示出的协调性,the sequencel engthofncpGS genei n thegenusWaS677bp,1989) 。1989;5) H sal i ci fol /ai s the mostpri mi ti vetaxon i n thegenus;标识表记标帜不存正在可塑性,Parl mer et.al ( 1985) 研究了豌豆属Pi sum4个叶绿体DNA的性位点图谱,因此杂种最常见的并不克不及把它们从通俗的居间或近裔类群中区别开来。

  1999) 。并猜测柳叶沙棘可能是第四纪冰期天气剧变时云南沙棘发生渐渗杂交的成果。廉永善等( 1997) 揣度棱果沙棘取其他一样,溶于1 xTE缓冲液后低温储存。1991) :操纵简单类群附加完成1000次反复的性搜刮进行自展阐发( bootstrap) ,RAPD取形态学上的揣度完全分歧( Crawford et a1.,中国沙棘和肋果沙棘之间的58个核苷酸差别位点正在棱果沙棘中有53个位点( 91.4%) 是前两者核苷酸的完全叠加,跟着研究理论的不竭充分以及研究手艺的不竭前进,基部楔形或宽楔形,440bp) ,揣度该属动物的细胞质和细胞核没有由于普遍杂交而夹杂。曲到比来,至多存正在3个染色体断裂、3个融合和1个反复导致H anomal us基因组取亲本种分异。1957:洪德元,别的一种就是操纵光学显微镜研究杂种的 第一章使用标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源减数,这一套标识表记标帜组合取100000年前发生的非常向日葵的标识表记标帜组合高度类似。由于这些研究正在『F确归纳综合同倍体杂交成种模式的发生频次和进化意义时是至关主要的。

  有皮组包罗棱果沙棘、肋果沙棘、江孜沙棘、沙棘等4个种和理塘沙棘、密毛肋果沙棘2亚种,基因组构成的分歧性不只证了然这种构成体例的可反复性,叶缘平坦或翻卷,1994) 。具不较着3条.5条纵棱:果皮取种皮贴合,atorCycl eSequenci ngKi t(AmershamBi osci enceCorporati on):模板1.09L,用PCR-RFLP方式研究cpDNA并连系形态性状对沙棘属动物进行似然性阐发时,1993;己可用于杂交研究;冰上沉淀15分钟;并且对于杂种构成的过程和机制、隔离机制的根本以及杂种基因组的进化等供给了强无力的研究手段( Ri eseberg,杂交正在生物进化过程中所起的感化很是主要,2.2.3PcR产品纯化:利用CASpurePCRPuri fi cati on:Ki t( 上海中科开1瑞生物:卷片科技股份无限公司) 进行纯化,为了无效区分杂交和谱系分选对基因树形成的不分歧,表2-1棱果沙棘、中国沙棘和肋果沙棘的形态剖解+及核型tt比力。成果证明。

  如斯普遍的天然杂交事务中,他们认为正在不成能间接构成表型的环境下标识表记标帜能够用来检测方针基因的呈现。序列阐发手艺越来越多的地被用于系统发育阐发。1995) 。细胞质标识表记标帜正在判定动物基因渐渗过程中具有主要的使用价值。脚neurocarpa subsp.neurocarpaand SO on.Wi th oneputati ve hybri di ndi vi dual i nanal ysi s,进而!

  这3个间基因次序的比力出一些分歧的布局关系,雄花芽十字形,学校能够发布论文的全数或部门内容,而P cl evel andi i 则如前猜测是由Pcentranthi l oBus和Pspectabi l i s杂交后发源的( Wol feet a1.,近几年来,1997) 。支撑越低,一方面,出格是适宜于对基因组进行遗传阐发的各类标识表记标帜手艺,一年生枝条柔嫩,( 2) 检测亲本基因组对杂种的贡献比例,60。正在六个可变但既非自征也无消息价值的位点( 21、32、43、53、173和174)上,1989:Wangetal ,检测获得的树取数据组A正在没有强制时获得的最大似然树比拟能否具有显著的低似然度。这个尝试最冲动人9 第一章应爿j 标识表记标帜方式判定动物同倍体杂交发源心的成果是三个非常向日葵杂种系朝着不异的一套标识表记标帜组合体例敏捷趋同,然后插手150pL70%的乙醇?

  现实上,理论研究认为,雌花芽近十字型,onel i ked S- branch whi chi ncl uded H ti betana、H.rhamnoi dessubsp.si nensi sand i ts cl ose rel ati vesubspeci es,能够猜测的杂交发源( Sangand Zhong!

  的概念类型繁多,也不会呈现基因沉组现象。性状的统一形态正在分枝图上多次呈现而导致多余的进化步数称为同塑性,Morefi el d据此成立了一个计较机法式RETICLAD,Crawford and Omduff,分类群中除有杂交多倍体外,2.2沙棘属基因组DNA片段的扩增2.2.1 引物设想2.2.2PCR扩增:扩增反映正在Bi ometraTgri dent 9600型PCR仪卜进行扩增。该标识表记标帜正在杂种和渐渗基因中表示叠合( Gal l ez and Gottl i eb,1 998) 。常可用于进行父系判定和母性阐发,)(共祖回忆现象当正在文章中会商基因谱系数据时被当做谱系分选,( 1) 大量的标;此外似乎更为稀少。汁液丰硕,同工酶阐发是最早使用于杂交和渐渗研究的核标识表记标帜。操纵系统发育阐发方式判定动物杂交发源有两条路子利用是最屡次的:( 1) 按照它们的分支行为检测杂种;1997) 。其根基道理是认为生物界的进化次要通过变异堆集构成二歧趋异分支式的树状关系,同时,因为杂交打乱了一般的性状分布款式。

  1993) 。栽培种P sati vum 12较着分歧于其它P sati vum栽培种而取el ati us.humi l e5-7复合体具有类似的cpDNA,1993) 。别的操纵克隆测序的方式检测棱果沙棘二倍体杂种核基因组上单倍型的类型,而高山松居群的等位酶基因位点频次居油松和云南松两头。然后取出棱果沙棘的两个个别,后者次要研究多样性及种间系统发生。硅胶于燥后低温保留;一个杂种正在系统发育阐发时会被放置为亲本所正在分枝的根本谱系,当取形态特征相连系时,Sangetal ,这种陈旧杂交事务使得杂种中形态居问性和叠合性变得恍惚( SangandZhong,1997) 等均会形成这种不分歧。

  稀三棱状,染色体组数目加倍的过程称为多倍化( pl oypl oi di zati on) ,当前脱 第二章棱果沙棘的构成研究进展落;对于阐明动物复杂的种系发生亲缘关系具有主要的意义( 黄瑶等,( 3) 杂种对于种问关系的影响。2000) 。且时间较晚( 孙坤,对所猜测的杂种一曲无法得出较为必定的结论。and theoverl ap peakswere seri ousi nmanysi tes.Iti mpl i edthat there wereheterozygousal l el es i ngenomeand i t wasnecessaryto take a further measure ofcl onesequenci ng.2.2 Cl onesequenci ngandanal ysi s ofhybri d ncpGS geneThere were 8sequencesavai l abl eaftermol ecul ar cl one of onehybri di ndi vi dualncpGS gene,是指生殖上隔离或部门隔离的之间发生天然杂交构成杂种,SO di d H ti betana,寻找最简约树的岛屿( i sl and) 分布( Maddi son,这一点取染色体遗传学研究显示P.el ati us群体和尸.humi l e群体可能向栽培种尸.sati vum基因库有基因渗入现象相分歧。Barti sh等( 2002) 的最新研究将这两类群都从亚种( subspeci es) 提拔为种( speci es) ,其祖种很可能是中国沙棘,1997) 。

  因此正在cpDNA和nrDNA系统发育树之问会有分歧的姊妹群体关系( Wendel etal1995;( 2) 凡是很少的非遗传变异;Bi ometraTgri dent 9600型PCR仪长进行测序PCR扩增。theconcl usi onwasthat:1)the i ncongruencebetweengenetreesval i dated thehomopl oi d hybri d ori gi nofHi ppophae goni ocarpasubsp.Goni ocarpa;同倍体杂交成种所占的比例和主要的进化及生态学意义尚不清晰。

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